Na jakim etapie zachodzi cykl kwasów trikarboksylowych? Cykl kwasów trikarboksylowych (cykl Krebsa). Uzupełnianie puli metabolitów cyklu TCA z aminokwasów

4. Cykl kwasów trikarboksylowych

Drugim składnikiem ogólnego szlaku katabolicznego jest cykl TCA. Cykl ten został odkryty w 1937 roku przez Krebsa i Johnsona. W 1948 roku Kennedy i Lehninger udowodnili, że enzymy cyklu TCA są zlokalizowane w macierzy mitochondrialnej.

4.1. Chemia cyklu kwasów trikarboksylowych. Wolnego kwasu octowego nie można utlenić przez odwodornienie. Dlatego też w swojej aktywnej formie (acetylo-CoA) wiąże się wstępnie ze szczawiooctanem (OA, kwas szczawiooctowy), w wyniku czego powstaje cytrynian.

1. Acetylo-CoA łączy się ze szczawiooctanem w reakcji kondensacji aldolowej katalizowanej przez syntaza cytrynianowa. Tworzy się Citrile-CoA. Citrile-CoA ulega hydrolizie przy udziale wody do cytrynianu i HS-CoA.

2. Hydrataza akonitowa (A konitaza) katalizuje konwersję cytrynianu do izocytrynianu na etapie kwasu cis-akonitowego. Mechanizm działania akonitazy obejmuje zarówno hydratazę, jak i izomerazę.

3. Dehydrogenaza izocytrynianowa katalizuje odwodornienie kwasu izocytrynowego do szczawianu bursztynianu (kwasu szczawiobursztynowego), który następnie ulega dekarboksylacji do 2-oksoglutaranu (α-ketoglutaranu). Koenzymem jest NAD+ (w mitochondriach) i NADP+ (w cytozolu i mitochondriach).

4. Kompleks dehydrogenazy 2-oksoglutaranu (kompleks dehydrogenazy α-ketoglutaranu) katalizuje oksydacyjną dekarboksylację 2-oksoglutaranu do sukcynylo-CoA. Multienzym Dehydrogenaza 2-oksoglutaranowa kompleks jest podobny do kompleksu dehydrogenazy pirogronianowej, a proces przebiega podobnie do oksydacyjnej dekarboksylacji pirogronianu.

5. Sukcynylotiokinaza katalizuje rozszczepienie sukcynylo-CoA na kwas bursztynowy i koenzym A. Energia z rozszczepienia sukcynylo-CoA jest magazynowana w postaci trifosforanu guanozyny (GTP). W reakcji sprzężonej refosforylacji ADP ulega fosforylacji do ATP, a uwolnione cząsteczki PKB mogą ponownie ulec fosforylacji ( fosforylacja substratu). W roślinach enzym jest specyficzny dla ADP i ATP.

6. Dehydrogenaza bursztynianowa katalizuje konwersję bursztynianu do kwasu fumarowego. Enzym jest stereospecyficzny, jest białkiem integralnym, ponieważ jest osadzony w wewnętrznej błonie mitochondriów i zawiera białka FAD i żelazo-siarkę jako grupy prostetyczne. FADN 2 nie jest oddzielany od enzymu i dwa elektrony są następnie przenoszone do koenzymu Q łańcucha transportu elektronów wewnętrznej błony mitochondrialnej.

7.Hydrataza fumaranowa (fumaraza) katalizuje konwersję kwasu fumarowego do kwasu jabłkowego (jabłczanu) przy udziale wody. Enzym jest stereospecyficzny i wytwarza wyłącznie L-jabłczan.

8.Dehydrogenaza jabłczanowa katalizuje utlenianie kwasu jabłkowego do szczawiooctanu. Koenzym dehydrogenazy jabłczanowej - NAD+. Następnie szczawiooctan ponownie kondensuje z acetylo-CoA i cykl się powtarza.

4.2. Znaczenie biologiczne i regulacja cyklu kwasów trikarboksylowych. Cykl kwasów trikarboksylowych jest składnikiem ogólnego szlaku katabolicznego, w którym zachodzi utlenianie cząsteczek paliwowych węglowodanów, kwasów tłuszczowych i aminokwasów. Większość cząsteczek paliwa wchodzi do cyklu TCA w postaci acetylo-CoA (ryc. 1). Wszystkie reakcje cyklu TCA przebiegają konsekwentnie w jednym kierunku. Całkowita wartość D G 0 ¢ = -40 kJ/mol.

Wśród lekarzy od dawna panuje powiedzenie: „Tłuszcze spalają się w płomieniach węglowodanów”. Należy przez to rozumieć utlenianie acetylo-CoA, którego głównym źródłem jest β-oksydacja kwasów tłuszczowych, po kondensacji ze szczawiooctanem, powstającym głównie z węglowodanów (podczas karboksylacji pirogronianu). W przypadku zaburzeń metabolizmu węglowodanów lub głodzenia powstaje niedobór szczawiooctanu, co prowadzi do zmniejszenia utleniania acetylo-CoA w cyklu TCA.

Ryc.1. Rola cyklu TCA w oddychaniu komórkowym. Etap 1 (cykl TCA) ekstrakcja 8 elektronów z cząsteczki acetylo-CoA; Etap 2 (łańcuch transportu elektronów) redukcja dwóch cząsteczek tlenu i utworzenie gradientu protonów (~36 H +); Etap 3 (syntaza ATP) wykorzystuje energię gradientu protonów do wytworzenia ATP (~9 ATP) (Berg J.M., Tymoczko J.L., Stryer L. Biochemistry. N-Y: W.H. Freeman and Company, 2002).

Główną rolę metaboliczną cyklu TCA można przedstawić w postaci dwóch procesów: 1) serii reakcji redoks, w wyniku których grupa acetylowa zostaje utleniona do dwóch cząsteczek CO2; 2) czterokrotne odwodornienie, prowadzące do powstania 3 cząsteczek NADH + H + i 1 cząsteczki FADH 2 . Tlen jest niezbędny do funkcjonowania cyklu TCA pośrednio jako akceptor elektronów na końcu łańcuchów transportu elektronów oraz do regeneracji NAD+ i FAD.

Synteza i hydroliza ATP ma podstawowe znaczenie dla regulacji cyklu TCA.

1. Dehydrogenaza izocytrynianowa jest allosterycznie aktywowana przez ADP poprzez zwiększenie powinowactwa enzymu do substratu. NADH hamuje ten enzym, zastępując NAD+. ATP hamuje również dehydrogenazę izocytrynianową. Ważne jest, że przemiana metabolitów do cyklu TCA wymaga NAD+ i FAD na kilku etapach, których ilość jest wystarczająca jedynie w warunkach niskiego ładunku energetycznego.

2. Aktywność kompleksu dehydrogenazy 2-oksoglutaranu (dehydrogenazy α-ketoglutaranu) jest regulowana podobnie jak regulacja kompleksu dehydrogenazy pirogronianowej . Kompleks ten jest hamowany przez sukcynylo-CoA i NADH (końcowe produkty przemian katalizowanych przez kompleks dehydrogenazy 2-oksoglutaranu). Dodatkowo kompleks dehydrogenazy 2-oksoglutaranu jest hamowany przez wysoki ładunek energetyczny komórki. Zatem tempo transformacji w cykl TCA maleje wraz z wystarczającym zaopatrzeniem komórki w ATP (ryc. 11.2). U wielu bakterii syntaza cytrynianowa jest allosterycznie hamowana przez ATP poprzez zwiększenie Km dla acetylo-CoA.

Schemat regulacji ogólnego szlaku katabolicznego przedstawiono na rycinie 2.

Ryż. 2. Regulacja ogólnego szlaku katabolizmu. Głównymi cząsteczkami regulującymi funkcjonowanie cyklu TCA są ATP i NADH. Głównymi punktami regulacji są dehydrogenaza izocytrynianowa i kompleks dehydrogenazy 2-oksoglutaranowej.

4.3. Rola energetyczna wspólnego szlaku katabolicznego

Na ogólnej ścieżce katabolizmu z 1 cząsteczki kwasu pirogronowego powstają 3 cząsteczki CO 2 w następujących reakcjach: podczas oksydacyjnej dekarboksylacji kwasu pirogronowego, podczas dekarboksylacji kwasu izocytrynowego i podczas dekarboksylacji kwasu 2-oksoglutarowego. W sumie podczas utleniania 1 cząsteczki kwasu pirogronowego usuwa się pięć par atomów wodoru, z czego jedna para pochodzi z bursztynianu i przechodzi do FAD z utworzeniem FADH 2, a cztery pary są przekształcane w 4 cząsteczki NAD + z utworzeniem 4 cząsteczek NADH + H + podczas oksydacyjnej dekarboksylacji kwasu pirogronowego, kwasów 2-oksoglutarowych, odwodornienia izocytrynianu i jabłczanu. Ostatecznie atomy wodoru są przenoszone na tlen, tworząc 5 cząsteczek H2O, a uwolniona energia jest akumulowana w reakcjach fosforylacji oksydacyjnej w postaci cząsteczek ATP.

Łączna suma:

1. Oksydacyjna dekarboksylacja pirogronianu ~ 2,5 ATP.

2. W cyklu TCA i powiązanych łańcuchach oddechowych znajduje się około 9 ATP.

3. W reakcji fosforylacji substratu cyklu TCA ~ 1 ATP.

W cyklu TCA i związanych z nim reakcjach fosforylacji oksydacyjnej podczas utleniania grupy acetylowej jednej cząsteczki acetylo-CoA powstaje około 10 ATP

Ogółem na ogólnej drodze katabolizmu w wyniku przemian 1 cząsteczki kwasu pirogronowego uwalnia się około 12,5 cząsteczek ATP.

Opowiadałam o tym, czym właściwie jest, do czego potrzebny jest cykl Krebsa i jakie miejsce zajmuje w metabolizmie. Przejdźmy teraz do samych reakcji tego cyklu.

Zaraz zrobię rezerwację – dla mnie osobiście zapamiętywanie reakcji było całkowicie bezsensowną czynnością, dopóki nie uporządkowałem powyższych pytań. Jeśli jednak zrozumiałeś już teorię, sugeruję przejście do praktyki.

Można zobaczyć wiele sposobów napisania cyklu Krebsa. Najczęstsze opcje są mniej więcej takie:

Ale to, co wydawało mi się najwygodniejsze, to sposób pisania reakcji ze starego, dobrego podręcznika biochemii autorstwa T.T. Bieriezowa. i Korovkina B.V.

Pierwsza reakcja

Znane już Acetylo-CoA i szczawiooctan łączą się i przekształcają w cytrynian, czyli w kwas cytrynowy.

Druga reakcja

Teraz bierzemy kwas cytrynowy i obracamy go kwas izocytrynowy. Inna nazwa tej substancji to izocytrynian.

W rzeczywistości reakcja ta jest nieco bardziej skomplikowana, poprzez etap pośredni - utworzenie kwasu cis-akonitowego. Postanowiłem jednak to uprościć, abyście lepiej to zapamiętali. Jeśli to konieczne, możesz dodać tutaj brakujący krok, jeśli pamiętasz wszystko inne.

W istocie dwie grupy funkcyjne po prostu zamieniły się miejscami.

Trzecia reakcja

Mamy więc kwas izocytrynowy. Teraz należy go zdekarboksylować (to znaczy usunąć COOH) i odwodornić (to znaczy usunąć H). Powstała substancja jest a-ketoglutaran.

Reakcja ta charakteryzuje się tworzeniem kompleksu HADH2. Oznacza to, że transporter NAD pobiera wodór, aby uruchomić łańcuch oddechowy.

Podoba mi się wersja reakcji cyklu Krebsa z podręcznika Bieriezowa i Korovkina właśnie dlatego, że atomy i grupy funkcyjne biorące udział w reakcjach są od razu wyraźnie widoczne.

Czwarta reakcja

Ponownie, dinukleotyd amidoadeninowy nikotyny działa jak w zegarku POWYŻEJ. Ten miły nośnik przybywa tutaj, tak jak w ostatnim kroku, aby pobrać wodór i przenieść go do łańcucha oddechowego.

Nawiasem mówiąc, uzyskana substancja jest sukcynylo-CoA, nie powinno Cię przerażać. Bursztynian to inna nazwa kwasu bursztynowego, znana Państwu z czasów chemii bioorganicznej. Sukcynylo-Coa jest związkiem kwasu bursztynowego z koenzymem-A. Można powiedzieć, że jest to ester kwasu bursztynowego.

Piąta reakcja

W poprzednim kroku powiedzieliśmy, że sukcynylo-CoA jest estrem kwasu bursztynowego. A teraz dostaniemy sama kwas bursztynowy, czyli bursztynian z sukcynylo-CoA. Niezwykle ważny punkt: to właśnie w tej reakcji fosforylacja substratu.

Fosforylacja ogólnie (może być utleniająca i substratowa) polega na dodaniu grupy fosforu PO 3 do PKB lub ATP w celu uzyskania pełnego GTF lub odpowiednio ATP. Podłoże różni się tym, że ta sama grupa fosforu jest odrywana od jakiejkolwiek substancji ją zawierającej. No cóż, najprościej mówiąc, jest on przenoszony z PODŁOŻA na HDF lub ADP. Dlatego nazywa się to „fosforylacją substratu”.

Jeszcze raz: na początku fosforylacji substratu mamy cząsteczkę difosforanu – difosforanu guanozyny lub difosforanu adenozyny. Fosforylacja polega na tym, że cząsteczka posiadająca dwie reszty kwasu fosforowego – HDP lub ADP – zostaje „kompletowana” w cząsteczkę zawierającą trzy reszty kwasu fosforowego, w wyniku czego powstaje TRIfosforan guanozyny lub TRIfosforan adenozyny. Proces ten zachodzi podczas konwersji sukcynylo-CoA do bursztynianu (tj. kwasu bursztynowego).

Na schemacie widać litery F (n). Oznacza „nieorganiczny fosforan”. Nieorganiczny fosforan jest przenoszony z substratu do HDP, dzięki czemu produkty reakcji zawierają dobry, kompletny GTP. Przyjrzyjmy się teraz samej reakcji:

Szósta reakcja

Następna transformacja. Tym razem zamieni się w kwas bursztynowy, który otrzymaliśmy w ostatnim kroku fumaran, zwróć uwagę na nowe wiązanie podwójne.

Diagram wyraźnie pokazuje, w jaki sposób uczestniczy on w reakcji CHWILOWA MODA: Ten niestrudzony nośnik protonów i elektronów wychwytuje wodór i wciąga go bezpośrednio do łańcucha oddechowego.

Siódma reakcja

Jesteśmy już na mecie. Przedostatni etap cyklu Krebsa to reakcja przekształcająca fumaran w L-jabłczan. L-jabłczan to inna nazwa Kwas L-jabłkowy, znane z kursu chemii bioorganicznej.

Jeśli przyjrzysz się samej reakcji, zobaczysz, że po pierwsze działa ona w obie strony, a po drugie jej istotą jest nawodnienie. Oznacza to, że fumaran po prostu przyłącza do siebie cząsteczkę wody, w wyniku czego powstaje kwas L-jabłkowy.

Ósma reakcja

Ostatnią reakcją Cyklu Krebsa jest utlenianie kwasu L-jabłkowego do szczawiooctanu, czyli do kwas szczawiooctowy. Jak rozumiesz, „szczawiooctan” i „kwas szczawiooctowy” są synonimami. Zapewne pamiętacie, że kwas szczawiooctowy jest składnikiem pierwszej reakcji cyklu Krebsa.

Tutaj zwracamy uwagę na specyfikę reakcji: tworzenie NADH2, który przeniesie elektrony do łańcucha oddechowego. Nie zapominaj, że powstają tam również reakcje 3, 4 i 6, w których powstają również nośniki elektronów i protonów dla łańcucha oddechowego.

Jak widać, specjalnie podkreśliłem na czerwono reakcje, podczas których powstają NADH i FADH2. Są to substancje bardzo ważne dla łańcucha oddechowego. Kolorem zielonym zaznaczyłem reakcję, w której zachodzi fosforylacja substratu i powstaje GTP.

Jak to wszystko zapamiętać?

Właściwie to nie jest takie trudne. Po przeczytaniu w całości moich dwóch artykułów, a także Twojego podręcznika i wykładów, wystarczy poćwiczyć pisanie tych reakcji. Polecam pamiętać cykl Krebsa w blokach po 4 reakcje. Zapisz te 4 reakcje kilka razy, dla każdej wybierając skojarzenie, które najbardziej odpowiada Twojej pamięci.

Na przykład od razu bardzo łatwo zapamiętałem drugą reakcję, w której kwas izocytrynowy powstaje z kwasu cytrynowego (który, jak sądzę, jest znany wszystkim od dzieciństwa).

Możesz także użyć mnemoników, takich jak: „ Cały ananas i kawałek sufletu to właściwie mój dzisiejszy lunch, co odpowiada serii - cytrynian, cis-akonitynian, izocytrynian, alfa-ketoglutaran, sukcynylo-CoA, bursztynian, fumaran, jabłczan, szczawiooctan. Takich jak oni jest o wiele więcej.

Ale szczerze mówiąc, prawie nigdy nie lubiłem takich wierszy. Moim zdaniem łatwiej jest zapamiętać samą sekwencję reakcji. Bardzo pomogło mi podzielenie cyklu Krebsa na dwie części, z których każdą ćwiczyłam pisanie kilka razy na godzinę. Z reguły działo się to na zajęciach takich jak psychologia czy bioetyka. Jest to bardzo wygodne – nie odrywając się od wykładu, możesz poświęcić dosłownie minutę na zapisanie reakcji tak, jak je zapamiętałeś, a następnie sprawdzić je odpowiednią opcją.

Nawiasem mówiąc, na niektórych uniwersytetach podczas sprawdzianów i egzaminów z biochemii nauczyciele nie wymagają znajomości samych reakcji. Trzeba tylko wiedzieć, czym jest cykl Krebsa, gdzie występuje, jakie są jego cechy i znaczenie oraz, oczywiście, sam łańcuch transformacji. Tylko łańcuch można nazwać bez wzorów, używając wyłącznie nazw substancji. Moim zdaniem takie podejście nie jest pozbawione sensu.

Mam nadzieję, że mój przewodnik po cyklu TCA był dla Ciebie pomocny. I chcę Ci przypomnieć, że te dwa artykuły nie zastępują całkowicie Twoich wykładów i podręczników. Napisałem je tylko po to, żebyście z grubsza zrozumieli, czym jest cykl Krebsa. Jeśli nagle zauważysz jakiś błąd w moim poradniku, napisz o tym w komentarzu. Dziękuję za uwagę!

Cykl kwasów trikarboksylowych odkrył w 1937 roku G. Krebs. W związku z tym nazwano go „cyklem Krebsa”. Proces ten jest główną ścieżką metabolizmu. Występuje w komórkach organizmów na różnych etapach rozwoju ewolucyjnego (mikroorganizmy, rośliny, zwierzęta).

Początkowym substratem cyklu kwasu trikarboksylowego jest acetylokoenzym A. Ten metabolit jest aktywną formą kwasu octowego. Kwas octowy jest powszechnym, pośrednim produktem rozkładu niemal wszystkich substancji organicznych zawartych w komórkach organizmów żywych. Dzieje się tak, ponieważ cząsteczki organiczne są związkami węgla, które w naturalny sposób mogą rozpaść się na dwuwęglowe jednostki kwasu octowego.

Wolny kwas octowy ma stosunkowo słabą reaktywność. Jego przemiany zachodzą w dość trudnych warunkach, które w żywej komórce są nierealne. Dlatego kwas octowy ulega aktywacji w komórkach poprzez połączenie go z koenzymem A. W efekcie powstaje aktywna metabolicznie forma kwasu octowego – acetylokoenzym A.

Koenzym A to związek o niskiej masie cząsteczkowej składający się z fosfoadenozyny, reszty kwasu pantotenowego (witaminy B3) i tioetanoloaminy. Pozostałość kwasu octowego dodaje się do grupy sulfhydrylowej tioetanoloaminy. Powstaje w tym przypadku tioeter – acetylokoenzym A, będący początkowym substratem cyklu Krebsa.

Acetylokoenzym A

Schemat transformacji produktów pośrednich w cyklu Krebsa pokazano na ryc. 67. Proces rozpoczyna się od kondensacji acetylokoenzymu A ze szczawiooctanem (kwasem szczawiooctowym, OCA), w wyniku czego powstaje kwas cytrynowy (cytrynian). Reakcja jest katalizowana przez enzym syntazę cytrynianową.

Rysunek 67 – Schemat transformacji produktów pośrednich w cyklu

kwasy trikarboksylowe

Ponadto pod działaniem enzymu akonitazy kwas cytrynowy przekształca się w kwas izocytrynowy. Kwas izocytrynowy ulega procesom utleniania i dekarboksylacji. W tej reakcji, katalizowanej przez enzym dehydrogenazę izocytrynianową zależną od NAD, produktami są dwutlenek węgla, zredukowany NAD i kwas α-ketoglutarowy, który następnie bierze udział w procesie oksydacyjnej dekarboksylacji (ryc. 68).

Rysunek 68 – Tworzenie kwasu a-ketoglutarowego w cyklu Krebsa

Proces oksydacyjnej dekarboksylacji a-ketoglutaranu jest katalizowany przez enzymy kompleksu multienzymów dehydrogenazy a-ketoglutaranu. Kompleks ten składa się z trzech różnych enzymów, do prawidłowego funkcjonowania wymaga koenzymów. Do koenzymów kompleksu dehydrogenazy a-keto-glutaranowej zaliczają się następujące witaminy rozpuszczalne w wodzie:

· witamina B 1 (tiamina) – pirofosforan tiaminy;

· witamina B 2 (ryboflawina) – FAD;

· witamina B3 (kwas pantotenowy) – koenzym A;

· witamina B 5 (nikotynamid) – NAD;

· substancja witaminopodobna – kwas liponowy.

Schematycznie proces oksydacyjnej dekarboksylacji kwasu a-keto-glutarowego można przedstawić jako następujące równanie reakcji bilansowej:

Produktem tego procesu jest tioester reszty kwasu bursztynowego (bursztynian) z koenzymem A – sukcynylo-koenzymem A. Wiązanie tioestrowe sukcynylo-koenzymu A jest makroergiczne.

Następną reakcją cyklu Krebsa jest proces fosforylacji substratu. W nim wiązanie tioestrowe sukcynylo-koenzymu A ulega hydrolizie pod działaniem enzymu syntetazy sukcynylo-CoA z utworzeniem kwasu bursztynowego (bursztynianu) i wolnego koenzymu A. Procesowi temu towarzyszy uwolnienie energii, która jest natychmiast wykorzystywany do fosforylacji HDP, w wyniku czego powstaje wysokoenergetyczna cząsteczka fosforanu GTP. Fosforylacja substratu w cyklu Krebsa:

gdzie Fn oznacza kwas ortofosforowy.

GTP powstający podczas fosforylacji oksydacyjnej może być wykorzystany jako źródło energii w różnych reakcjach energozależnych (w procesie biosyntezy białek, aktywacji kwasów tłuszczowych itp.). Ponadto GTP można zastosować do wytworzenia ATP w reakcji kinazy nukleozydowo-difosforanowej

Produkt reakcji syntetazy sukcynylo-CoA, bursztynian, ulega dalszemu utlenianiu przy udziale enzymu dehydrogenazy bursztynianowej. Enzym ten to dehydrogenaza flawinowa, która zawiera cząsteczkę FAD jako koenzym (grupa prostetyczna). W wyniku reakcji kwas bursztynowy utlenia się do kwasu fumarowego. Jednocześnie przywracany jest FAD.

gdzie E oznacza grupę prostetyczną FAD związaną z łańcuchem polipeptydowym enzymu.

Kwas fumarowy powstający w reakcji dehydrogenazy bursztynianowej pod wpływem enzymu fumarazy (ryc. 69) przyłącza cząsteczkę wody i przekształca się w kwas jabłkowy, który następnie w reakcji dehydrogenazy jabłczanowej ulega utlenieniu do kwasu szczawiooctowego (szczawiooctanu). Ten ostatni można ponownie zastosować w reakcji syntazy cytrynianowej do syntezy kwasu cytrynowego (ryc. 67). Z tego powodu przekształcenia w cyklu Krebsa mają charakter cykliczny.

Rycina 69 – Metabolizm kwasu jabłkowego w cyklu Krebsa

Równanie bilansowe cyklu Krebsa można przedstawić jako:

Pokazuje, że w cyklu następuje całkowite utlenienie rodnika acetylowego reszty z acetylokoenzymu A do dwóch cząsteczek CO2. Procesowi temu towarzyszą powstawanie trzech cząsteczek zredukowanego NAD, jednej cząsteczki zredukowanego FAD i jednej cząsteczki wysokoenergetycznego fosforanu – GTP.

Cykl Krebsa zachodzi w matrix mitochondrialnej. Dzieje się tak dlatego, że to właśnie tam zlokalizowana jest większość jego enzymów. Tylko jeden enzym, dehydrogenaza bursztynianowa, jest wbudowany w wewnętrzną błonę mitochondrialną. Poszczególne enzymy cyklu kwasu trikarboksylowego łączą się w funkcjonalny kompleks wieloenzymowy (metabolon) związany z wewnętrzną powierzchnią wewnętrznej błony mitochondrialnej. Łącząc enzymy w metabolon, znacznie zwiększa się efektywność funkcjonowania tego szlaku metabolicznego i pojawiają się dodatkowe możliwości jego precyzyjnej regulacji.

Cechy regulacji cyklu kwasu trikarboksylowego są w dużej mierze zdeterminowane jego znaczeniem. Proces ten spełnia następujące funkcje:

1) energia. Cykl Krebsa jest najpotężniejszym źródłem substratów (zredukowanych koenzymów – NAD i FAD) do oddychania tkankowego. Dodatkowo magazynowana jest w nim energia w postaci wysokoenergetycznego fosforanu – GTP;

2) Plastikowy. Produkty pośrednie cyklu Krebsa są prekursorami syntezy różnych klas substancji organicznych - aminokwasów, monosacharydów, kwasów tłuszczowych itp.

Cykl Krebsa pełni zatem podwójną funkcję: z jednej strony jest ogólną drogą katabolizmu, odgrywającą centralną rolę w zaopatrzeniu komórki w energię, z drugiej zaś zapewnia procesy biosyntezy z substratami. Takie procesy metaboliczne nazywane są amfibolicznymi. Cykl Krebsa jest typowym cyklem amfibolicznym.

Regulacja procesów metabolicznych w komórce jest ściśle powiązana z istnieniem „kluczowych” enzymów. Kluczowymi enzymami w procesie są te, które decydują o jego szybkości. Zazwyczaj jednym z „kluczowych” enzymów w procesie jest enzym, który katalizuje jego początkową reakcję.

„Kluczowe” enzymy charakteryzują się następującymi cechami. Te enzymy

· katalizują reakcje nieodwracalne;

· mają najmniejszą aktywność w porównaniu do innych enzymów biorących udział w procesie;

· są enzymami allosterycznymi.

Kluczowymi enzymami cyklu Krebsa są syntaza cytrynianowa i dehydrogenaza izocytrynianowa. Podobnie jak kluczowe enzymy w innych szlakach metabolicznych, ich aktywność jest regulowana przez ujemne sprzężenie zwrotne: maleje wraz ze wzrostem stężenia półproduktów cyklu Krebsa w mitochondriach. Zatem kwas cytrynowy i sukcynylo-koenzym A działają jako inhibitory syntazy cytrynianowej, a zredukowany NAD działa jako dehydrogenaza izocytrynianowa.

ADP jest aktywatorem dehydrogenazy izocytrynianowej. W warunkach rosnącego zapotrzebowania komórki na ATP jako źródło energii, gdy wzrasta w niej zawartość produktów rozpadu (ADP), powstają przesłanki do zwiększenia tempa przemian redoks w cyklu Krebsa i w konsekwencji zwiększenia poziomu jej zaopatrzenia w energię .

CYKL KWASÓW TRÓJKARBOKSYLOWYCH

CYKL KWASKÓW TRÓJKARBOKSYLOWYCH – cykl kwasu cytrynowego, zwany także cyklem Krebsa, to szeroko reprezentowany w organizmach zwierząt, roślin i drobnoustrojów szlak oksydacyjnych przemian kwasów di- i trikarboksylowych powstających jako produkty pośrednie podczas rozkładu i syntezy białek, tłuszczów i węglowodany. Odkryte przez H. Krebsa i W. Johnsona (1937). Cykl ten stanowi podstawę metabolizmu i spełnia dwie ważne funkcje - dostarczanie organizmowi energii i integrowanie wszystkich głównych przepływów metabolicznych, zarówno katabolicznych (biodegradacja), jak i anabolicznych (biosynteza).

Cykl Krebsa składa się z 8 etapów (produkty pośrednie zostały wyróżnione na schemacie w dwóch etapach), podczas których następuje:

1) całkowite utlenienie reszty acetylowej do dwóch cząsteczek CO2,

2) powstają trzy cząsteczki zredukowanego dinukleotydu nikotynoamidoadeninowego (NADH) i jednego zredukowanego dinukleotydu flawinoadeninowego (FADH2), który jest głównym źródłem energii wytwarzanej w cyklu oraz

3) jedna cząsteczka trifosforanu guanozyny (GTP) powstaje w wyniku tzw. utleniania substratu.

Ogólnie rzecz biorąc, ścieżka jest korzystna energetycznie (DG0" = –14,8 kcal.)

Cykl Krebsa, zlokalizowany w mitochondriach, rozpoczyna się od kwasu cytrynowego (cytrynianu), a kończy utworzeniem kwasu szczawiooctowego (szczawiooctanu – OA). Substratami cyklu są kwasy trikarboksylowe – cytrynowy, cis-akonitowy, izocytrynowy, szczawiobursztynian (szczawiobursztynian) oraz kwasy dikarboksylowe – 2-ketoglutarowy (KG), bursztynowy, fumarowy, jabłkowy (jabłczan) i szczawiooctowy. Do substratów cyklu Krebsa zalicza się także kwas octowy, który w swojej aktywnej formie (tj. w postaci acetylokoenzymu A, acetylo-SCoA) bierze udział w kondensacji z kwasem szczawiooctowym, prowadząc do powstania kwasu cytrynowego. Utlenianiu ulega reszta acetylowa zawarta w strukturze kwasu cytrynowego; atomy węgla ulegają utlenieniu do CO2, atomy wodoru są częściowo akceptowane przez koenzymy dehydrogenaz, a częściowo przechodzą do roztworu, czyli do otoczenia w formie protonowanej.

Kwas pirogronowy (pirogronian), który powstaje podczas glikolizy i zajmuje jedno z centralnych miejsc w przecinających się szlakach metabolicznych, jest zwykle wskazywany jako związek wyjściowy do tworzenia acetylo-CoA. Pod wpływem enzymu o złożonej budowie – dehydrogenazy pirogronianowej (CP1.2.4.1 – PDHase), pirogronian ulega utlenieniu do CO2 (pierwsza dekarboksylacja), acetylo-CoA i redukcji przez NAD (patrz schemat). Jednak utlenianie pirogronianu nie jest jedyną drogą do powstania acetylo-CoA, który jest również charakterystycznym produktem utleniania kwasów tłuszczowych (enzym tiolaza lub syntetaza kwasów tłuszczowych) i innych reakcji rozkładu węglowodanów i aminokwasów. Wszystkie enzymy biorące udział w reakcjach cyklu Krebsa zlokalizowane są w mitochondriach, większość z nich jest rozpuszczalna, a dehydrogenaza bursztynianowa (KF1.3.99.1) jest ściśle związana ze strukturami błonowymi.

Powstawanie kwasu cytrynowego, którego synteza rozpoczyna właściwy cykl, za pomocą syntazy cytrynianowej (EC4.1.3.7 - enzym kondensujący na schemacie), jest reakcją endergoniczną (z absorpcją energii) i jej realizacją jest możliwe dzięki zastosowaniu wysokoenergetycznego wiązania reszty acetylowej z KoA [CH3CO~SKoA]. Jest to główny etap regulacji całego cyklu. Następnie następuje izomeryzacja kwasu cytrynowego do kwasu izocytrynowego poprzez pośredni etap tworzenia kwasu cis-akonitowego (enzym akonitaza KF4.2.1.3 ma absolutną stereospecyficzność - wrażliwość na lokalizację wodoru). Produktem dalszej transformacji kwasu izocytrynowego pod wpływem odpowiedniej dehydrogenazy (dehydrogenazy izocytrynianowej KF1.1.1.41) jest najwyraźniej kwas oksalobursztynowy, którego dekarboksylacja (druga cząsteczka CO2) prowadzi do CG. Ten etap jest również ściśle regulowany. Pod wieloma względami (wysoka masa cząsteczkowa, złożona struktura wieloskładnikowa, reakcje stopniowe, częściowo te same koenzymy itp.) Dehydrogenaza KH (EC1.2.4.2) przypomina PDHazę. Produktami reakcji są CO2 (trzecia dekarboksylacja), H+ i sukcynylo-CoA. Na tym etapie aktywowana jest syntetaza sukcynylo-CoA, zwana inaczej tiokinazą bursztynianową (EC6.2.1.4), katalizująca odwracalną reakcję tworzenia wolnego bursztynianu: Sukcynylo-CoA + Pneorg + PKB = Bursztynian + KoA + GTP. Podczas tej reakcji zachodzi tzw. fosforylacja substratu, tj. tworzenie bogatego w energię trifosforanu guanozyny (GTP) kosztem difosforanu guanozyny (PKB) i fosforanu mineralnego (Pneorg) przy wykorzystaniu energii sukcynylo-CoA. Po utworzeniu bursztynianu zaczyna działać dehydrogenaza bursztynianowa (KF1.3.99.1), flawoproteina, prowadząc do kwasu fumarowego. FAD jest powiązany z częścią białkową enzymu i jest metabolicznie aktywną formą ryboflawiny (witaminy B2). Enzym ten charakteryzuje się także absolutną stereospecyficznością w eliminacji wodoru. Fumaraza (EC4.2.1.2) zapewnia równowagę pomiędzy kwasem fumarowym i jabłkowym (również stereospecyficzna), a dehydrogenaza kwasu jabłkowego (dehydrogenaza jabłczanowa EC1.1.1.37, która wymaga koenzymu NAD +, jest również stereospecyficzna) prowadzi do zakończenia cyklu Krebsa, czyli do powstania kwasu szczawiooctowego. Następnie powtarza się reakcję kondensacji kwasu szczawiooctowego z acetylo-CoA, prowadząc do powstania kwasu cytrynowego i cykl się wznawia.

Dehydrogenaza bursztynianowa jest częścią bardziej złożonego kompleksu dehydrogenazy bursztynianowej (kompleksu II) łańcucha oddechowego, dostarczającego równoważniki redukujące (NAD-H2) powstałe podczas reakcji z łańcuchem oddechowym.

Na przykładzie PDHazy można zapoznać się z zasadą kaskadowej regulacji aktywności metabolicznej w wyniku fosforylacji-defosforylacji odpowiedniego enzymu przez specjalną kinazę i fosfatazę PDHazę. Oba są podłączone do PDGase.

CYKL KWASÓW TRÓJKARBOKSYLOWYCH

Przyjmuje się, że kataliza poszczególnych reakcji enzymatycznych odbywa się w ramach supramolekularnego „superkompleksu”, tzw. „metabolonu”. Zaletami takiej organizacji enzymów jest brak dyfuzji kofaktorów (koenzymów i jonów metali) oraz substratów, co przyczynia się do efektywniejszej pracy cyklu.

Efektywność energetyczna rozważanych procesów jest niska, jednakże ważnymi produktami przemian oksydacyjnych są 3 mole NADH i 1 mol FADH2 powstałe podczas utleniania pirogronianu i kolejnych reakcji cyklu Krebsa. Ich dalsze utlenianie odbywa się za pomocą enzymów łańcucha oddechowego także w mitochondriach i wiąże się z fosforylacją, czyli tzw. powstawanie ATP w wyniku estryfikacji (tworzenie estrów fosforoorganicznych) fosforanu mineralnego. Glikoliza, enzymatyczne działanie PDHazy i cykl Krebsa – łącznie 19 reakcji – decydują o całkowitym utlenieniu jednej cząsteczki glukozy do 6 cząsteczek CO2 z utworzeniem 38 cząsteczek ATP – tej „waluty energetycznej” komórki. Proces utleniania NADH i FADH2 przez enzymy łańcucha oddechowego jest bardzo wydajny energetycznie, zachodzi przy wykorzystaniu tlenu atmosferycznego, prowadzi do powstania wody i stanowi główne źródło zasobów energetycznych komórki (ponad 90%). Jednak enzymy cyklu Krebsa nie biorą udziału w jego bezpośredniej realizacji. Każda komórka człowieka posiada od 100 do 1000 mitochondriów, które dostarczają energii życiowej.

Podstawą integrującej funkcji cyklu Krebsa w metabolizmie jest to, że węglowodany, tłuszcze i aminokwasy z białek można ostatecznie przekształcić w produkty pośrednie (półprodukty) tego cyklu lub z nich zsyntetyzować. Usunięcie półproduktów z cyklu podczas anabolizmu musi być połączone z kontynuacją aktywności katabolicznej cyklu w celu ciągłego tworzenia ATP niezbędnego do biosyntezy. Zatem pętla musi spełniać dwie funkcje jednocześnie. Jednocześnie może spaść stężenie półproduktów (zwłaszcza OA), co może prowadzić do niebezpiecznego spadku produkcji energii. Aby temu zapobiec, istnieją „zawory bezpieczeństwa”, zwane reakcjami anaplerotycznymi (od greckiego „napełniać”). Najważniejszą reakcją jest synteza OA z pirogronianu, prowadzona przez karboksylazę pirogronianową (EC6.4.1.1), również zlokalizowaną w mitochondriach. W rezultacie gromadzi się duża ilość OA, co zapewnia syntezę cytrynianu i innych półproduktów, co pozwala na normalne funkcjonowanie cyklu Krebsa, a jednocześnie zapewnia usunięcie półproduktów do cytoplazmy w celu późniejszej biosyntezy. Zatem na poziomie cyklu Krebsa następuje efektywnie skoordynowana integracja procesów anabolizmu i katabolizmu pod wpływem licznych i subtelnych mechanizmów regulacyjnych, w tym hormonalnych.

W warunkach beztlenowych, zamiast cyklu Krebsa, jego gałąź utleniająca przechodzi do KG (reakcje 1, 2, 3), a gałąź redukcyjna przechodzi z OA do bursztynianu (reakcje 8®7®6). W tym przypadku nie magazynuje się dużo energii, a cykl dostarcza jedynie półproduktów do syntezy komórkowej.

Kiedy organizm przechodzi z odpoczynku do aktywności, pojawia się potrzeba mobilizacji procesów energetycznych i metabolicznych. Osiąga się to w szczególności u zwierząt poprzez omijanie najwolniejszych reakcji (1–3) i dominujące utlenianie bursztynianu. W tym przypadku w reakcji szybkiej transaminacji (przeniesienia grupy aminowej) powstaje KG, będący początkowym substratem skróconego cyklu Krebsa

Glutaminian + OA = CG + asparaginian

Kolejną modyfikacją cyklu Krebsa (tzw. bocznik 4-aminomaślanowy) jest konwersja KG do bursztynianu poprzez glutaminian, 4-aminomaślan i semialdehyd bursztynowy (kwas 3-formylopropionowy). Ta modyfikacja jest ważna w tkance mózgowej, gdzie około 10% glukozy ulega rozkładowi tą drogą.

Ścisłe powiązanie cyklu Krebsa z łańcuchem oddechowym, szczególnie w mitochondriach zwierząt, a także hamowanie większości enzymów cyklu pod wpływem ATP, determinują spadek aktywności cyklu przy wysokim potencjale fosforylowym komórka, tj. przy wysokim stosunku stężeń ATP/ADP. U większości roślin, bakterii i wielu grzybów ścisłe sprzęganie zostaje przezwyciężone poprzez rozwój niezwiązanych alternatywnych szlaków utleniania, które pozwalają na utrzymanie jednoczesnego oddychania i aktywności cyklicznej na wysokim poziomie nawet przy wysokim potencjale fosforylowym.

Igor Rapanowicz

CYKL KWASÓW TRÓJKARBOKSYLOWYCH

poprzedni

← 1 2 3 dalej

Literatura

Strayer L. Biochemia. Za. z angielskiego M., Mir, 1985

Bohinski R. Współczesne poglądy w biochemii. Przetłumaczone z języka angielskiego, M., Mir, 1987

Knorre D.G., Myzina S.D. Chemia biologiczna. M., Szkoła Wyższa, 2003

Kolman J., Rem K.-G. Biochemia wizualna. M., Mir, 2004

Krótka informacja historyczna

Naszym ulubionym cyklem jest cykl TCA, czyli cykl kwasów trikarboksylowych – życie na Ziemi i pod Ziemią oraz w Ziemi… Stop, w ogóle jest to najbardziej niesamowity mechanizm – jest uniwersalny, jest to sposób na utlenienie produkty rozkładu węglowodanów, tłuszczów, białek w komórkach organizmów żywych, w wyniku czego pozyskujemy energię do działania naszego organizmu.

Proces ten odkrył sam Hans Krebs, za co otrzymał Nagrodę Nobla!

Urodził się 25 sierpnia – 1900 roku w niemieckim mieście Hildesheim. Uzyskał wykształcenie medyczne na Uniwersytecie w Hamburgu, a badania biochemiczne kontynuował pod kierunkiem Otto Warburga w Berlinie.

W 1930 roku wraz ze swoim uczniem odkrył proces neutralizacji amoniaku w organizmie, który występował u wielu przedstawicieli świata żywego, w tym także u człowieka. Cykl ten to cykl mocznikowy, znany również jako cykl Krebsa nr 1.

Kiedy Hitler doszedł do władzy, Hans wyemigrował do Wielkiej Brytanii, gdzie kontynuuje studia ścisłe na uniwersytetach w Cambridge i Sheffield. Rozwijając badania węgierskiego biochemika Alberta Szent-Györgyi, uzyskał wgląd i stworzył najsłynniejszy cykl Krebsa nr 2, czyli inaczej „cykl Szent-Györgyö – Krebs” – 1937.

Wyniki badań przesyłane są do czasopisma Nature, które odmawia publikacji artykułu. Następnie tekst leci do magazynu „Enzymologia” w Holandii. Krebs otrzymał Nagrodę Nobla w 1953 roku w dziedzinie fizjologii lub medycyny.

Odkrycie było zaskakujące: w 1935 roku Szent-Györgyi odkrył, że kwasy bursztynowy, szczawiooctowy, fumarowy i jabłkowy (wszystkie 4 kwasy są naturalnymi składnikami chemicznymi komórek zwierzęcych) wzmagają proces utleniania w mięśniu piersiowym gołębia. Który został rozdrobniony.

To w nim procesy metaboliczne zachodzą z największą prędkością.

F. Knoop i K. Martius w 1937 roku odkryli, że kwas cytrynowy przekształca się w kwas izocytrynowy poprzez produkt pośredni, kwas cis - akonitowy. Ponadto kwas izocytrynowy można przekształcić w kwas α-ketoglutarowy, a ten w kwas bursztynowy.

Krebs zauważył wpływ kwasów na wchłanianie O2 przez mięsień piersiowy gołębia i stwierdził aktywujący wpływ na utlenianie PVC i tworzenie acetylo-koenzymu A. Ponadto kwas malonowy hamował procesy zachodzące w mięśniu , który jest podobny do kwasu bursztynowego i może konkurencyjnie hamować enzymy, których substratem jest kwas bursztynowy.

Kiedy Krebs dodał kwas malonowy do środowiska reakcyjnego, rozpoczęła się akumulacja kwasów a-ketoglutarowego, cytrynowego i bursztynowego. Zatem jasne jest, że połączone działanie kwasu a-ketoglutarowego i cytrynowego prowadzi do powstania kwasu bursztynowego.

Hans zbadał ponad 20 innych substancji, ale nie miały one wpływu na utlenianie. Porównując uzyskane dane, Krebs otrzymał cykl. Badacz na samym początku nie był w stanie z całą pewnością stwierdzić, czy proces rozpoczął się od kwasu cytrynowego, czy izocytrynowego, dlatego nazwał go „cyklem kwasu trikarboksylowego”.

Teraz wiemy, że pierwszy to kwas cytrynowy, więc prawidłowa nazwa to cykl cytrynianowy lub cykl kwasu cytrynowego.

U eukariontów reakcje cyklu TCA zachodzą w mitochondriach, podczas gdy wszystkie enzymy katalityczne, z wyjątkiem 1, znajdują się w stanie wolnym w macierzy mitochondrialnej; wyjątkiem jest dehydrogenaza bursztynianowa, która jest zlokalizowana na wewnętrznej błonie mitochondrium i jest osadzona w dwuwarstwy lipidowej. U prokariotów reakcje cyklu zachodzą w cytoplazmie.

Poznajmy uczestników cyklu:

2) szczupak – szczawiooctan – kwas szczawiooctowy:
wydaje się składać z dwóch części: kwasu szczawiowego i octowego.

3-4) Kwas cytrynowy i izocytrynowy:

5) Kwas a-ketoglutarowy:

6) Sukcynylo-Koenzym A:

7) Kwas bursztynowy:

8) Kwas fumarowy:

9) Kwas jabłkowy:

Jak zachodzą reakcje? Generalnie wszyscy jesteśmy przyzwyczajeni do wyglądu pierścionka, co pokazano poniżej na zdjęciu. Poniżej wszystko jest opisane krok po kroku:

1. Kondensacja acetylokoenzymu A i kwasu szczawiooctowego ➙ kwasu cytrynowego.

Transformacja acetylokoenzymu A rozpoczyna się od kondensacji z kwasem szczawiooctowym, w wyniku czego powstaje kwas cytrynowy.

Reakcja nie wymaga zużycia ATP, gdyż energia do tego procesu dostarczana jest w wyniku hydrolizy wiązania tioeterowego z acetylokoenzymem A, który jest wysokoenergetyczny:

2. Kwas cytrynowy przechodzi przez kwas cis-akonitowy do kwasu izocytrynowego.

Następuje izomeryzacja kwasu cytrynowego do kwasu izocytrynowego. Enzym konwertujący – akonitaza – najpierw odwadnia kwas cytrynowy, tworząc kwas cis-akonitowy, następnie łączy wodę z podwójnym wiązaniem metabolitu, tworząc kwas izocytrynowy:

3. Kwas izocytrynowy ulega odwodornieniu z wytworzeniem kwasu α-ketoglutarowego i CO2.

Kwas izocytrynowy jest utleniany przez specyficzną dehydrogenazę, której koenzymem jest NAD.

Równolegle z utlenianiem następuje dekarboksylacja kwasu izocytrynowego. W wyniku przemian powstaje kwas α-ketoglutarowy.

4. Kwas alfa-ketoglutarowy jest odwodorniony przez ➙ sukcynylo-koenzym A i CO2.

Kolejnym etapem jest oksydacyjna dekarboksylacja kwasu α-ketoglutarowego.

Katalizowany przez kompleks dehydrogenazy α-ketoglutaranowej, który ma podobny mechanizm, strukturę i działanie do kompleksu dehydrogenazy pirogronianowej. W rezultacie powstaje sukcynylo-CoA.

5. Sukcynylokoenzym A ➙ kwas bursztynowy.

Sukcynylo-CoA ulega hydrolizie do wolnego kwasu bursztynowego, uwolniona energia jest magazynowana poprzez tworzenie trifosforanu guanozyny. Ten etap jest jedynym w cyklu, w którym energia jest bezpośrednio uwalniana.

6. Kwas bursztynowy jest odwodorniony ➙ kwas fumarowy.

Odwodornienie kwasu bursztynowego przyspiesza dehydrogenaza bursztynianowa, jej koenzymem jest FAD.

7. Kwas fumarowy jest uwodniony ➙ kwas jabłkowy.

Kwas fumarowy powstający w wyniku odwodornienia kwasu bursztynowego ulega uwodnieniu i powstaje kwas jabłkowy.

8. Kwas jabłkowy ulega odwodornieniu. ➙ Kwas szczawiowo-octowy – cykl się zamyka.

Ostatnim procesem jest odwodornienie kwasu jabłkowego, katalizowane przez dehydrogenazę jabłczanową;

Wynikiem tego etapu jest metabolit, z którym rozpoczyna się cykl kwasu trikarboksylowego – kwas szczawiowo-octowy.

W reakcji 1 następnego cyklu pojawi się kolejna ilość acetylokoenzymu A.

Jak zapamiętać ten cykl? Tylko!

2) Kolejny długi wiersz:

szczupak zjadł octan, okazuje się cytrynian,
Poprzez cisaconitate stanie się izocytrynianem.
Oddając wodór NAD-owi traci CO2,
Alfa-ketoglutaran jest z tego powodu niezwykle szczęśliwy.
Nadchodzi utlenianie - NAD ukradł wodór,
TDP, koenzym A pochłania CO2.
A energia ledwo pojawiła się w sukcynylu,
Natychmiast narodził się ATP, a pozostałością był bursztynian.
Teraz trafił do FAD - potrzebuje wodoru,
Fumaran wypił z wody i zamienił się w jabłczan.
Następnie NAD doszedł do jabłczanu, nabył wodór,
PIKE pojawił się ponownie i po cichu się ukrył.

3) Oryginalny wiersz - w skrócie:

szczupak ACETYL LIMONIL,
Ale koń bał się narcyza,
Jest nad nim ISOLIMON
ALFA - KETOGLUTARASD.
SKUKCYNALIZOWANY KOENZYMEM,
BURSZTYN FUMAROWO,
Zgromadziłem trochę JABŁEK na zimę,
Znów zamienił się w SZCZUPKA.